原位雜交檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
背景介紹：
原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定，具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)，有與探針結(jié)合的標(biāo)記物。
案例展示
原位雜交送樣要求：
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樣品類型 |
樣品要求 |
保存條件 |
運(yùn)輸條件 |
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新鮮組織 |
新鮮取材組織，PBS清洗干凈，-80℃保存； |
-80℃ |
干冰 |
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固定組織 |
盡量保持組織的原有形態(tài)，標(biāo)注固定液類型和固定時(shí)間； |
常溫 |
常溫 |
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組織蠟塊 |
組織由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟盒包埋，盡量提供半年內(nèi)的包埋蠟塊； |
4℃ |
冰袋 |
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組織切片 |
防脫載玻片進(jìn)行撈片，注明切片厚度，烤片溫度和時(shí)間； |
4℃ |
冰袋 |
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細(xì)胞爬片 |
使用孔板專用的爬片，PBS清洗2-3次，封口膜封板，備注分組信息； |
常溫 |
常溫 |
